作者：汪宇
原標(biāo)題：非洲豬瘟疫苗何時有？
非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒（ASFV）感染引起家豬、疣豬、歐洲野豬和美洲野豬的一種傳染性極強(qiáng)的出血性疾病。所有年齡的豬都易感。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報(bào)告的動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。 由于ASFV的抗感染機(jī)制十分復(fù)雜、基因型多（22個基因型）且病毒容易變異，故ASF疫苗一直未研究成功，但國外科學(xué)家一直在不斷嘗試。 一、滅活疫苗 滅活疫苗作為最經(jīng)典的疫苗研制方式，在非洲豬瘟發(fā)現(xiàn)之后即已開始研發(fā)，但早期落后的滅活工藝無法取得滿意的制苗效果。例如經(jīng)加熱，復(fù)方碘溶液，甲苯，福爾馬林，結(jié)晶紫，β-丙內(nèi)酯，乙酰氮丙啶和縮水甘油醛處理的ASF滅活疫苗雖部分能刺激豬產(chǎn)生抗體但即使借助佐劑仍無法抵御ASFV的攻擊。感染豬的脾組織加上佐劑制作的疫苗保護(hù)范圍有限且保護(hù)率也只有70%，攻毒后存活下來的豬也都表現(xiàn)臨床癥狀。 越來越多的科學(xué)家認(rèn)識到細(xì)胞免疫在抵抗ASFV的感染過程中起到至關(guān)重要的作用。但是由于滅活疫苗本身的原因，很難刺激機(jī)體產(chǎn)生高水平的細(xì)胞免疫，盡管使用了目前為止效果最好的佐劑，對于刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫反應(yīng)的程度也是非常有限，完全達(dá)不到有效的保護(hù)效果。 小結(jié)： 1、ASF滅活疫苗免疫后可產(chǎn)生高效價的抗體，但很難檢測到中和抗體的存在； 2、迄今為止，采用多種傳統(tǒng)方法制備的ASF滅活疫苗均不能對強(qiáng)毒攻擊提供有效的免疫保護(hù)； 3、自家滅活疫苗也無效； 4、細(xì)胞免疫在ASF疫苗免疫保護(hù)中起重要作用。 二、弱毒疫苗 1、傳代弱毒苗 傳代過程中，ASFV致病力逐漸下降，同時病毒免疫原性和穩(wěn)定性也隨之下降。在葡萄牙和西班牙進(jìn)行的田間試驗(yàn)，特別是在葡萄牙，550,000只豬免疫后有128,684只出現(xiàn)嚴(yán)重的免疫副反應(yīng)，肺炎、運(yùn)動障礙、皮膚潰瘍、流產(chǎn)甚至死亡，同時出現(xiàn)大量病毒攜帶豬。而且隨后出現(xiàn)的ASF疫情中分離的弱毒株也很有可能來自此次疫苗接種。 Krug等人利用分離株ASFV-G在Vero細(xì)胞中進(jìn)行傳代至第110代完全喪失毒力，接種家豬后又不能獲得相應(yīng)的保護(hù)力。 所以傳代致弱的ASFV安全性較差同時也不能提供有效的免疫保護(hù)。 2、天然弱毒苗 采用天然致弱ASFV毒株免疫動物能夠產(chǎn)生較好的針對同源強(qiáng)毒株的攻毒保護(hù)，保護(hù)率在66%~100%之間。 以O(shè)URT88/3免疫并用致弱性O(shè)URT88/1毒株進(jìn)行加強(qiáng)免疫后，可以增加I 型干擾素的產(chǎn)生和增強(qiáng)干擾素的反應(yīng)強(qiáng)度，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對ASFV I型不同分離毒株的交叉保護(hù)，但是可造成諸多副反應(yīng)。 3、重組弱毒苗 隨著全基因測序技術(shù)的不斷成熟以及ASFV基因功能的不斷探索，通過基因敲除毒力基因或者免疫抑制基因的方式制備ASF弱毒疫苗的可能性越來越大。 研究表明，一些ASFV毒株在缺失某些毒力基因或免疫抑制基因后，缺失毒株接種宿主毒力減弱且可誘導(dǎo)產(chǎn)生針對同源母本毒株或異源毒株的特異性免疫保護(hù)。例如，多基因家族360和530里面的基因，胸苷激酶基因和B119L或9GL基因，這些基因刪除后可以降低病毒的毒力；例如，編碼A238L蛋白、CD2v 蛋白、C-型凝集素和細(xì)胞凋亡抑制因子的基因被刪除后可能會對豬產(chǎn)生適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)反應(yīng)。 小結(jié)： 1、弱毒活疫苗能夠誘導(dǎo)強(qiáng)烈持久的免疫應(yīng)答，但生物安全是其使用的主要限制因素； 2、通過基因重組、靶向缺失以及一次性侵染技術(shù)來增強(qiáng)弱毒活疫苗的安全性。
三、載體疫苗 Lokhandwala等人將ASFV p32、p54等基因分別重組入人腺病毒Ad5載體中，能夠獲得良好的抗原特異性反應(yīng)。 也有學(xué)者將ASFV保護(hù)性抗原重組入腺病毒或痘病毒載體，以期獲得更好的細(xì)胞免疫反應(yīng)。但上述研究仍需通過攻毒保護(hù)試驗(yàn)來驗(yàn)證病毒活載體疫苗在使用中是否具有可行性。
四、核酸疫苗 核酸疫苗也就是DNA疫苗，是指將編碼某種抗原蛋白的重組真核表達(dá)載體直接注射到動物體內(nèi)，使外源基因在宿主細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)內(nèi)合成抗原蛋白，誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生針對該抗原蛋白的特異性的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答，以達(dá)到預(yù)防和治療疫病的目的。 Argilaguet等將P30和P54基因與豬白細(xì)胞抗原II的特異性抗體單鏈可變區(qū)在真核表達(dá)載體中融合表達(dá)；接種該疫苗后，能夠使部分動物獲得一定的免疫保護(hù)效果。 雖然根據(jù)一個或兩個ASFV抗原構(gòu)建的DNA疫苗并不能誘導(dǎo)產(chǎn)生高水平的免疫保護(hù)效果，但是通過表達(dá)文庫構(gòu)建的4029個表達(dá)質(zhì)粒進(jìn)行的免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果來看，保護(hù)率達(dá)到60%，且免疫攻毒后存活的豬無排毒現(xiàn)象，這標(biāo)志了核酸疫苗邁出的一大步。 小結(jié)：隨著ASFV基因組及保護(hù)性抗原的不斷深入研究以及表達(dá)載體的不斷改造優(yōu)化，DNA疫苗一定會在未來ASF疫苗市場上占據(jù)一席之地。
五、亞單位疫苗 ASF亞單位疫苗的研究策略主要是將具有中和表位的非洲豬瘟病毒保護(hù)性抗原基因在原核或真核細(xì)胞中表達(dá)，并將產(chǎn)生的蛋白質(zhì)或多肽遞呈給抗原遞呈細(xì)胞，以誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的抗非洲豬瘟病毒的中和抗體。 P72，P30和P54是感染過程中引起體液免疫應(yīng)答最重要的3個抗原蛋白。針對P30的抗體可以阻止病毒內(nèi)吞，針對P72和P54的抗體可以阻止病毒吸附，但是將這三個蛋白制備疫苗具有一定的局限性。有研究表明，用p30和p54蛋白制備的疫苗僅能提供50%的保護(hù)，P54/30重組蛋白不能提供免疫保護(hù)，僅能延緩臨床癥狀的出現(xiàn)時間和降低病毒血癥水平。而多項(xiàng)試驗(yàn)都表明了單純的將蛋白作為疫苗使用有多方面的不足。 小結(jié)：單純依靠一個或幾個病毒基因表達(dá)的蛋白很難達(dá)到免疫預(yù)防效果。 來源：中牧股份
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